Improving of the nested PCR for detection of bovine leukemia virus [Text] / I. M. Ishchenko [et al.] // Мікробіологічний журнал. - 2021. - Том 83, N 3. - P56-65 MeSH-главная: КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА БОЛЕЗНИ -- CATTLE DISEASES (диагностика) ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ВИРУС -- LEUKEMIA VIRUS, BOVINE ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ -- POLYMERASE CHAIN REACTION (методы) ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ -- REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION (методы) НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ АМПЛИФИКАЦИИ МЕТОДЫ -- NUCLEIC ACID AMPLIFICATION TECHNIQUES (методы) ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В АГАРОВОМ ГЕЛЕ -- ELECTROPHORESIS, AGAR GEL (методы) Аннотация: Згідно з протоколом Всесвітньої організації охорони здоров’я тварин для діагностики лейкозу великої рогатої худоби методом полімеразної ланцюгової реакції необхідно застосовувати її гніздовий формат як найбільш чутливий. Однак висока чутливість одночасно є і її недоліком через високий ризик контамінації продуктами ампліфікації та, як наслідок – отримання псевдопозитивних результатів. Найбільш небезпечним етапом з огляду на контамінацію є електрофорез продуктів ампліфікації в агарозному гелі. Мета. Метою роботи було удосконалити гніздовий формат полімеразної ланцюгової реакції, який рекомендується протоколом Всесвітньої організації охорони здоров’я, шляхом проведення другої стадії методом полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі, що дозволить зменшити ризик контамінації, оскільки не буде потреби у проведенні електрофорезу в агарозному гелі для інтерпретації результатів. Методи. Для першої стадії запропонованої модифікації полімеразної ланцюгової реакції було використано нуклеотидну послідовність праймерів, рекомендованих протоколом Всесвітньої організації охорони здоров’я тварин. Для другої стадії полімеразної ланцюгової реакції проведено дизайн праймерів та флуоресцентного зонду на основі аналізу нуклеотидних послідовностей ділянки оболонкового гену відомих ізолятів вірусу лейкозу, включаючи українські ізоляти. Крім того, для другої стадії було проведено дизайн праймерів для ідентифікації гену, специфічного для великої рогатої худоби, що дозволяє контролювати процес екстракції нуклеїнової кислоти у кожному зразку. Висновки. Запропонована нами модифікація гніздової полімеразної ланцюгової реакції поєднує в собі рекомендації Всесвітньої організації охорони здоров’я тварин щодо ідентифікації вірусу лейкозу за допомогою гніздової полімеразної ланцюгової реакції та зменшення ризику контамінації за рахунок проведення другої стадії в режимі реального часу, що є зручнішим у рутинній діагностиці. Крім того, ампліфікація гену, специфічного для великої рогатої худоби у запропонованій модифікації, дозволяє контролювати якість та кількість екстракції нуклеїнової кислоти та попереджати хибнонегативні результати дослідження. Доп.точки доступа: Ishchenko, I. M.; Nedosekov, V. V.; Ishchenko, V. D.; Kepple, O. Yu.; Tkachenko, V. V.; Tkachenko, T. A.; Midyk, S. V.; Nemova, T. V.; Melnychuk, S. D.; Spyrydonov, V. G.; Ushkalov, V. O. Экз-ры: